探索氟替卡松加沙美特罗绑定网站测试版2-adrenergic使用新颖的光亲和配体受体,iodoazidosalmeterol(125)我。
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荣Y, Arbabian M, Thiriot DS, Seibold,克拉克RB, Ruoho AE
探索氟替卡松加沙美特罗绑定网站测试版2-adrenergic使用新颖的光亲和配体受体,iodoazidosalmeterol(125)我。
生物化学。1999年8月31日,38 (35):11278 - 86。
- PubMed ID
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10471277 (在PubMed]
- 文摘
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氟替卡松加沙美特罗是一个长效beta2-adrenergic受体(β2 ar)受体激动剂临床用于治疗哮喘。除了绑定在活性受体激动剂,它已经被提出,氟替卡松加沙美特罗还在第二个网站结合能力非常高,被称为“exosite”,而这exosite导致氟替卡松加沙美特罗的长时间的作用。确定位置的苯基环aralkyloxyalkyl氟替卡松加沙美特罗侧链的β2基于“增大化现实”技术的结合位点,我们设计和合成受体激动剂光亲和标签[(125)我]iodoazidosalmeterol ([125 I] IAS)。直接激活腺苷酸环化酶,影响腺苷酸环化酶预处理后完整的细胞,在豚鼠气管放松化验,IAS和父药物氟替卡松加沙美特罗的行为本质上是相同的。值得注意的是,IAS定位的叠氮化photoreactive苯基环的分子被认为是参与exosite绑定。无载体radioiodinated [125 i] IAS用于photolabel epitope-tagged人类beta 2基于“增大化现实”技术在膜稳定转染HEK 293细胞。标签与[(125)我]IAS被10 microM(-)阿普洛尔并通过添加三磷酸鸟苷抑制伽马年代,和[125 I] IAS在同一位置的sds - page凝胶迁移的beta 2 ar拮抗剂光亲和标记的标签[125 I] iodoazidobenzylpindolol ([125 I] IABP)。标签受体在镍亲和柱纯化和裂解因素Xa蛋白酶在特定序列在大跨膜段5和6之间循环,产生两个肽。而控制对手光亲和标签[125 i] IABP标记两大n端片段(含有跨膜(TMs) 1 - 5)和较小的c端片段(包含TMs 6和7),基本上所有的[125 i] IAS标签是在较小的c端肽包含TMs 6和7。这种直接生化证据表明,氟替卡松加沙美特罗与受体结合时,其疏水性aryloxyalkyl尾巴位置附近TM 6和/或TM 7。 A model of IAS binding to the beta 2AR is proposed.