表达人类all-trans-retinoic酸β受体及其配体结合域在大肠杆菌。
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伯格伦索德伦德M, Johannesson G, Fex G
表达人类all-trans-retinoic酸β受体及其配体结合域在大肠杆菌。
j . 1995 5月15日,308 (Pt (1): 353 - 9。
- PubMed ID
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7755585 (在PubMed]
- 文摘
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all-trans-Retinoic酸、激素活性的维生素A的衍生品,生理上发生在等离子体浓度低于10 nmol / l。目前用于量化的方法高效液相色谱法的基础上,需要大约1毫升的血清,相对较费力,因此不适合大规模的分析。视黄酸受体的亲和力和特异性all-trans-retinoic酸都鼓励我们表达整个人类视黄酸受体β(RAR-beta)和两个版本的视黄结合域希望这些重组蛋白在大肠杆菌可能用作all-trans-retinoic绑定在一个配体结合试验酸。重组受体,受体[RAR-beta - (V7-Q448)],对应域f,与配体结合域[RAR-beta - (E149-Q448)], D-F对应域,在向量表示宠物3 d / BL21 (DE3)包涵体,可溶性氯胍盐,用离子交换色谱法纯化。RAR-beta (P193-Q448),相应的域E-F,表达向量宠物3 d / BL21 (DE3) pLysS,并通过反相色谱纯化。non-denaturing条件下,整个表达受体[RAR-beta - (V7-Q448)]和D-F构造(RAR-beta - (E149-Q448)]表现色析法地作为单体的蛋白质而E-F构造[RAR-beta - (P193-Q448)]有很强的聚集的倾向。RAR-beta - (V7-Q448)和RAR-beta all-trans-retinoic酸(E149-Q448)也有类似的Kd值(分别为1.4和0.6 nmol / l)而RAR-beta——(P193-Q448)绑定all-trans-retinoic酸少贪婪地(Kd 9.6 nmol / l)。9-cis-Retinoic酸绑定到RAR-beta - (E149-Q448)和RAR-beta (V7-Q448)一样热切地all-trans-retinoic酸。竞争实验显示弱或没有绑定4-oxo-all-trans-retinoic酸,4-oxo-13-cis-retinoic酸,13-cis-retinoic酸,acitretin和视黄醇RAR-beta——(E149-Q448)。